危害鸡免疫系统的四种病毒性疾病

2019-12-05 02:51 来源:未知

  危害鸡免疫系统的四种病毒性疾病
【摘要】禽白血病、传染性法氏囊病、鸡传染性贫血、禽网状内皮增生症是引起鸡群免疫缺陷的几种常见疫病,根据国内近几年的血清学调查研究及分子生物学诊断相关报道表明,几种免疫缺陷性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中均普遍存在,使得鸡群处于免疫力低下的状态,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,并容易造成继发感染,使疫病的诊断和防控难度加大。论文就4种常见的鸡病毒性免疫缺陷病的免疫缺陷机理、流行状况及实验室诊断技术等方面研究进展进行综述。

 

  

禽类病毒性免疫缺陷疾病是困扰当前养禽业的重要传染病,由于免疫缺陷的存在,生产中极易并发和继发其他传染性疾病和寄生虫病。很多病毒的感染可引起机体的免疫缺陷,如禽白血病、传染性法氏囊病等,这些引起禽类免疫缺陷的大多数病毒具有垂直传播特点,使该类疫病在鸡群中长期存在,难以净化,严重影响家禽的生长及生产性能,给养禽业造成了巨大经济损失。

  

 

  

1家禽病毒性免疫缺陷病的种类

  

 

  

家禽的免疫缺陷性病有很多种,常见的病原有禽白血病病毒(Rauscher leukemia virus,ALV)、网状内皮组织增生症病毒(Retieuloendotheliosis vi—rus,REV)和鸡传染性贫血病毒(Chicken infectiousannemia virus,CAV)等具有很强的引起机体免疫缺陷作用,而呼吸道疾病如新城疫、禽流感等本身也具有免疫缺陷性。虽然它们分别能引起特定的临床症状和病变,但其中有些病毒感染却无明显临床症状,以诱发鸡群的免疫缺陷状态为其主要表现,仅在特定的条件下才表现出特异性症状和病变;有些病毒的某些致病型毒株仅引起免疫缺陷;有的病毒则在没有出现特异症状和病变前的感染早期就以免疫缺陷为其主要致病作用。笔者通过阅读大量文献资料发现,禽白血病(Avian leukosis,AL)、传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)、传染性贫血(Chicken infectious anemia,CIA)、网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是普遍认为引起鸡群免疫缺陷的常见病毒性疾病。

  

 

  

2 4种病毒性免疫缺陷疾病及免疫缺陷机理

  

 

  

能够引起免疫缺陷疾病的病毒在致病作用上有一个共同的特点,即大多数造成免疫缺陷的病毒直接损害法氏囊、胸腺、脾等重要的的免疫器官,使机体参与免疫应答的器官、组织和细胞受到破坏,导致T、B淋巴细胞等免疫细胞数量的减少,功能降低,引起免疫功能不可逆转的损害。

  

 

  

2.1 禽白血病

  

 

  

禽白血病是由反转录病毒科(Re£ro以以如P)禽白血病病毒或肉瘤病毒群病毒(Avian leukosis/sar—coma virus)引起的以造血细胞增生为主的多种肿瘤性疾病的总称。根据病毒囊膜糖蛋白抗原结构不同、各个病毒之间的干扰模式、及在不同遗传型鸡胚成纤维细胞上的宿主范围的不同,将病毒分为A—J10个亚群,其中A、B、J是危害鸡群引起免疫缺陷的主要亚群。其中ALJ—V常表现为血管瘤、肉瘤、神经胶质瘤、成红细胞白血病等不同的形式[1]。

  

 

  

ALV感染后禽的B细胞发展转化,形成B淋巴肿瘤细胞,随着肿瘤细胞的不断增生,严重影响了IgG细胞的合成能力,其表面仅带IgM,而没有IgG或IgA;随着淋巴器官及骨髓的变性和退化,功能性白细胞介素2(IL一2)的合成逐步受到干扰,导致B淋巴细胞成熟停止,从而引起免疫缺陷。张利[21通过人工接种1日龄及7日龄SPF雏鸡ALV—JV进行分组试验,1日龄雏鸡从接种后第2周开始胸腺、法氏囊和脾脏出现持续的抑制,主要表现为淋巴细胞的变性和坏死,其中胸腺中的淋巴细胞流失最为严重,在第5周时,这3种免疫器官的间质结缔组织明显增生,免疫功能完全丧失;7日龄SPF雏鸡接种后2周内主要表现为免疫器官的炎症反应一淋巴细胞增殖,在3周龄以后淋巴细胞开始大量流失,5周龄时淋巴细胞流失约70%以上,问质结缔组织明显增生。血细胞检测发现,ALV—J感染组粒细胞、淋巴细胞和红细胞均有下降,粒细胞下降尤为明显,而胸腺和脾脏的CD4+T细胞数量明显下降,CD8+T细胞数量明显升高,说明机体的免疫缺陷和这两种细胞的变化有明显相关。商营利等[31通过人工接种建立了雏鸡感染ALV—J后发生免疫缺陷的病理模型,对免疫缺陷的机理进行了初步研究,结果表明,ALV-J主要引起骨髓的髓系细胞灶状或弥漫性增生,病变导致骨髓机能受损,使机体免疫功能下降,是引起免疫缺陷的根本性原因。试验中病毒感染组免疫器官均发生了严重的实质萎缩性病变,这种病变的发生除了与骨髓的病变及淋巴细胞凋亡有关外,还与中后期淋巴细胞的坏死有直接关系,从而导致严重的免疫缺陷。

  

 

  

2.2传染性法氏囊病

  

 

  

鸡传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)引起的一种高度接触性传染病,主要危害3周龄~6周龄的青年鸡,以法氏囊的发炎、坏死、萎缩和法氏囊内淋巴细胞严重受损为主要特征。IBDV主要损害的靶器官为淋巴器官,最严重的是法氏囊,严重感染未成熟的B细胞或B细胞前体细胞,使之很快变性或坏死,同时IBDV可以感染巨嗜细胞,造成细胞死亡或细胞的功能紊乱。因此,该病的主要危害是引起鸡的免疫机能障碍,从而影响各种疫苗的免疫应答,甚至导致免疫失败。俞英防等[41将传染性法氏囊病病毒人工感染5周龄的SPF鸡,通过HE染色、切片、显微镜观察发现,在攻毒后感染鸡法氏囊中有大量破损的细胞和细胞丢失所产生的空泡,尤其是攻毒后15 d和18 d法氏囊严重萎缩,囊小结多数被结缔组织替代。刘志贵等[5]将IBDV接种于1日龄和4周龄雏鸡,对全身免疫器官和局部免疫组织、外周血液和局部体液的免疫学变化,包括体液免疫和细胞免疫及其相互关系进行了全面的系统的研究。结果表明,雏鸡感染IBDV后,其免疫器官不仅有以法氏囊病变为主的病理学变化,而且出现了中枢免疫器官和外周免疫器官的体液免疫和细胞免疫机能的降低,这是引起免疫缺陷的主导环节和关键的变化。中枢免疫器官的病理变化,一方面是由于淋巴细胞的变性坏死,前B细胞在法氏囊和前T细胞在胸腺内分化和成熟受阻,使免疫器官本身的免疫活性细胞数量明显减少和免疫功能降低;另一主面是从中枢免疫器官进入外周免疫器官内成熟T、B细胞数量明显减少,进一步影响全身和局部的免疫功能。

  

 

  

2.3鸡传染性贫血

  

 

  

鸡传染性贫血是由鸡传染性贫血病毒(Chickeninfectious anemia virus,CIAV或CAV)引起的一种具有传染性的再生障碍性贫血和全身淋巴器官萎缩的免疫缺陷性疾病,感染鸡在临床上常表现为生长发育迟缓、贫血、渗出性皮炎,胸腺、法氏囊、脾脏、胰腺、肝脏、肾脏、十二指肠和盲肠扁桃体以及其他组织内淋巴细胞严重缺失或萎缩。感染鸡传染性贫血的鸡由于免疫器官受损、淋巴细胞数量减少、增殖反应减弱,导致抗体生成水平明显降低,加上细胞因子调节功能障碍,最终出现体液和细胞免疫的抑制。

  

 

  

邓博文等在对鸡传染性贫血免疫缺陷机理研究时发现口],雏鸡感染CAV后,其泪液、气管液、肠液和胆汁中的lgA、lgG、lgM、含量均有不同程度下降,表明感染雏鸡眼部、呼吸道消化道等局部体液免疫功能受损,从而使感染雏鸡对其他疫病,如NDV、MDV、IBDV等易感性增大。Noteborn M H M等[73认为,CAV感染的靶细胞主要是骨髓和胸腺中的红细胞和淋巴细胞,病毒侵入这些组织的T细胞和成红细胞时,VP3编码基因开始表达A脱噬素;因脱噬素形体分子非常小且具有偏碱的特性,因此能在染色质结构内与组蛋白或非组蛋白相互作用,导致DNA超螺旋结构受破坏而断裂,使胸腺皮质细胞和骨髓成红细胞发生凋亡,造成机体的免疫缺陷和贫血。

  

 

  

2.4禽网状内皮组织增生症

  

 

  

禽网状内皮组织增生症是由网状内皮增生症病毒(REV)引起的鸡、火鸡、鸭、鹌鹑等以淋巴细胞、网状细胞增生为特征的肿瘤性疾病,可引起感染禽的急性网状细胞肿瘤,或淋巴组织与其他组织形成的慢性肿瘤,还可引起胸腺、法氏囊等免疫组织器官的萎缩。感染REV的家禽其法氏囊等免疫组织器官萎缩,影响B细胞的分化成熟,而v—rel致瘤基因可引起B淋巴细胞转化成肿瘤细胞,同时辅助性T细胞亚群数量急剧下降,白细胞介素-2(IL一2)及于扰素等多种细胞因子分泌明显减少,从而导致免疫功能障碍。同时,由于病毒感染导致辅助性T细胞亚群数量的急剧下降,也影响了B细胞的免疫应答。朱国等[8]用REV病毒人工接种1日龄肉种鸡,通过病理组织学观察病变发现肝脏、脾脏、胸腺、法氏囊较早出现明显的肿瘤增生灶,免疫组化染色最早出现阳性,说明在这些器官中抗原出现最早,表明其中可能存在REV的靶细胞,之后心肌、腺胃、肺、肾、骨髓等器官才开始出现免疫组化染色阳性信号,虽然阳性信号在腺胃出现较晚,但90%以上的腺胃肿大说明腺胃也是REV的主要侵害器官。

  

 

  

REV抗原在法氏囊、胸腺、脾脏内大量存在,造成机体各免疫器官严重变性坏死,使机体免疫功能严重受损。孙洪磊等[93通过对接种REV鸡的免疫器官指数、组织学变化进行动态观察,及对免疫器官的细胞凋亡动态检测发现,接种两周后可检测到REV抗体,其中枢免疫器官发育分化不良,且以胸腺的影响最为明显,胸腺指数明显下降;免疫器官主要表现实质细胞数量少,正常结构发育不良,间质结缔组织增生而发生纤维化;细胞凋亡检测证实免疫器官的淋巴细胞和巨噬细胞均有明显的凋亡现象。

  

 

  

3家禽免疫缺陷病的流行状况

  

 

  

据国内近几年的相关血清学调查研究和分子生物学诊断报道,鸡免疫缺陷性病在我国很多地区都有发生,并形成一定的地方性流行;同时,大量的试验也表明,不同病毒和细菌的多重感染是鸡群临床上最多见的现象。

  

 

  

3.1禽白血病

  

 

  

我国20世纪50年代首次在甘肃发现禽白血病,并很快蔓延到大部分地区。尤永君等[9]调查发现,禽白血病在我国普遍存在,吉林、山东、辽宁、江苏、河北、河南、湖北等省市的养殖密集区域均发现过该病,且在某些地区流行还十分严重。我国鸡群中主要是外源性鸡白血病毒感染,一般为ALV—J感染,ALV—J是20世纪80年代末英国首次从肉鸡中发现和分离、鉴定的禽白血病病毒的新亚群。自1999年杜岩等[1们在国内首次从市场肉鸡、肉种鸡场的病鸡肿瘤中分离检出ALV—J后,近年来ALV—J在全国呈蔓延趋势,华东、华北、华南地区都有该病的报道,给部分鸡场造成了巨大经济损失。刘功振等口明首次在国内从感染禽白血病J亚群的海蓝白商品蛋鸡群中分离到B亚群禽白血病病毒。一般来说,肉鸡的禽白血病并不是一个重要的疾病,然而,近年以来,禽白血病在我国部分省市大面积散发,给我国养鸡业带来了一定的危害。

  

 

  

3.2传染性法氏囊病

  

 

  

IBD由Gosgrove A S[121于1962年首次报道,目前已遍及所有的养鸡国家,给养鸡业带来巨大的经济损失。我国1979年首先在广州发现,之后在全国各省市都有发生,在1990年前后全国各地出现了大流行。近些年来,由于疫苗、高免血清和卵黄抗体等免疫制品的广泛应用,该病流行情况出现了相应变化,发病无明显季节性、发病日龄区间增大、侵袭对象扩大、病变不再典型、病程较长、病死率有所下降,但免疫鸡群仍有较高的发病率等是当前法氏囊病流行的特点[1 3。南方部分省(区)IBD发病流行状况监测显示,2007年监测到9个省(区)的459家鸡场发病,IBD的病死率在0.1%~lo%之间,2008年监测到11个省(区)的865个鸡场发病,IBD的病死率在0.1%~8%之间,2009年监测到11个省(区)的523个发病鸡场,IBD的病死率在0.1%~30%之间。

  

 

  

3.3鸡传染性贫血

  

 

  

1979年,Yuasa N等[1 53首次在日本分离到CAV,目前所有养禽国都已经分离到了该病毒[16,崔现兰等[17]1992年在我国首次分离到了CAV,并采用间接免疫荧光法对沈阳、大连、哈尔滨等地部分鸡场进行CAV抗体检测,阳性率在40%~50%之间。胡北侠口83等对不同肉种禽场进行了血清学调查,发现无论是否进行了CAV疫苗免疫,种鸡群在开产前20周CAV抗体阳性率均达100%。胡晓苗等[1 9]对安徽省不同地区17个鸡场6个外来品种(系)鸡和7个不同地方品种鸡的493份血清样本进行CAV抗体检测,结果显示,被检的17个鸡场均为抗体阳性场,阳性率在44.4%~100%之间。

  

 

  

3.4禽网状内皮组织增生症

  

 

  

REV—T毒株是在1957年从患有内脏淋巴肿瘤的火鸡中分离出来的,Theilen等证实了REV T毒株对雏鸡、火鸡和鹌鹑等具有急性致瘤性,因其肿瘤病变中存在的主要成分属网状内皮组织,因此将这一疾病称为网状内皮组织增生症。何宏虎等[20]于1986年在南京首次从鸡分离到REV,经鉴定为非缺陷型REV,并定名为REV—C45。何勇群等[2妇从北京11个鸡场随机抽取204份血样,检出阳性血样28份,阳性率为13.7%。于立娟等n2]2006年在鸡痘病毒中检测分离到整合的REV,董海岚[23]对南阳地区规模鸡场REV的血清学调查显示,所检测的4个种鸡场7个批次共350份血样中,REV平均阳性率为44.6%,所检测的20个正常商品鸡场的1000份血样中,REV平均阳性率为29.8%。

  

 

  

近年来,免疫缺陷病病毒感染家禽所引起的免疫缺陷现象日益严重,多以亚临床感染的形式出现而容易被忽视,且这些免疫缺陷病在鸡群中的二重或多重感染非常普遍。康昭风[24]对江西省主要养鸡地区4种鸡免疫缺陷病的血清学调查发现,目前江西省各地饲养的鸡群中这4种免疫缺陷病的感染相当普遍,而且多为混合感染,感染1种及以上免疫缺陷病的鸡群达到99.13%,同时感染2种及以上免疫缺陷病的鸡群为56,96%,同时感染3种及以上免疫缺陷病的鸡群为20.43%,同时感染4种免疫缺陷病的鸡群也有2.17%。秦立廷[25]对我国部分地区蛋鸡群ALV-J、REV、MDV、CAV混合感染检测发现7个省蛋鸡场均存在ALV—J感染,病料样品阳性率达60.9%,检测鸡群阳性率达82.1%,与REV、MDV、CAV的混合感染率分别为13.6%、24.5%和22.8%,双重感染为29.0%,3重感染为18.8%,甚至有四重感染。

  

 

  

4病毒性免疫缺陷病诊断技术

  

 

  

病毒性免疫缺陷病的早期确诊、及时发现,对有效控制这类疾病非常重要。血清学、病理形态学、免疫学、分子生物学等诊断技术,结合临床症状的应用,已广泛运用到禽类病毒性免疫缺陷病的诊断中。

  

 

  

4.1禽白血病诊断技术

  

 

  

临床上需要采取病理学、血清学和病毒学相结合的方法,才能对ALV进行诊断,目前国内外已建立了ALV的间接免疫荧光检测技术、酶联免疫吸附试验、病毒中和试验、免疫组化技术等免疫学检测方法,及PCR、原位PCR、核酸原位杂交法等核酸分子检测方法。如Smith E J等L26]用CuCl2裂解法提纯了p27蛋白(p27蛋白是病毒核心外壳的主要成分,p27基因在禽白血病病毒不同亚群之间具有高度保守的特性,是制备禽白血病特异性抗体及单抗的首选抗原),并用纯化的p27免疫家兔,获得了兔抗p27高免血清(R12),建立了检测ALV抗原的双抗体夹心ELtSA法,具有简便、快捷、敏感、高效的优点,适用于大面积检测。Zhang X T等[2叩以普通水浴锅和3对特异性LAMP引物建立了一种ALV—J的LAMP检测技术,其敏感性大大高于普通PCR。

  

 

  

4.2传染性性氏囊病诊断技术

  

 

  

常见的免疫学和分子生物技术已广泛应用于IBD的诊断,在1981年Howle R I等[2明首次应用ELISA进行IBDV的检测,结果表明此方法检测IBDV快速、特异性、敏感性和重复性都非常好。王忠灿等口o]对多中IBDV检测方法进行了比较,发现病毒分离培养结论准确可靠,但耗时、费力;就琼脂免疫扩散试验(AGP)、间接ELISA、夹心抑制ELISA、中和试验等4种诊断方法比较而言,前3种方法更为敏感;而夹心ELISA、RT—PCR、cDNA探针斑点杂交试验适应于检测各种试验样品,并且具有高度的敏感性和特异性;用RT—PCR/SSCP技术可快速的分析IBDV基因变异,但不能区分血清亚型。

  

 

  

4.3鸡传染性贫血

  

 

  

对于CAV已建立了多种ELISA方法,用于检测和定量鸡血清中CAV抗体,PCR、DNA探针、中和试验也广泛应用于该病的实验室诊断与鉴定。Miller M M等口妇用套式PCR方法检测孵化后的鸡胚组织和蛋膜,用于分析SPF母鸡后代中是否存在CAV的DNA。童桂香等口21根据CAV基因组保守区域设计了一对扩增片段为164 bp的特异性引物,应用SYBR Green工染料建立了CAV荧光定量PCR检测方法,该方法有快速、定量、特异、敏感、重复性好等优点。邓显文等口胡根据基因库中CAV的保守序列,设计一套特异性环介导恒温扩增(LAMP)引物,建立了CAV的LAMP可视化检测方法。

  

 

  

4.4 网状内皮组织增生症诊断技术

  

 

  

目前,国内外已建立起了REV琼脂免疫扩散试验、间接免疫荧光抗体试验、间接ELISA方法以及ABC—ELISA等方法检测REV抗体,病毒的分离培养虽然费时耗力,仍是最经典、最准确的诊断方法。随着近几年分子生物学的发展,REV的检测技术也有了很大的进步,如Hauck R等日4j基于LightCycler平台,利用SYBR Green工染料能特异性与双链DNA结合而发荧光的特性,建立了一种荧光PCR方法检测REV,实现了对PCR扩增产物进行实时动态检测和自动分析结果,减少了PCR扩增产物的污染。李凯等口53根据GenBank中REV病毒基因组序列设计了一对针对REV gp90基因的引物和一条特异性TaqMan探针,建立了一种快速检测REV病毒载量的荧光定量PCR方法,具有良好的敏感性、特异性和重复性。

  

 

  

5 综合防控

  

 

  

免疫缺陷病的存在,极大地增加了禽病的发生率和治疗难度,给养禽业带来了巨大的经济损失。免疫缺陷病的发生往往与应激、营养水平、药物使用、饲料霉变、传染性因素等紧密联系,因此,要防控免疫缺陷病,还需从科学免疫、加强综合管理措施等方面入手。在家禽饲养中可以从加强家禽的饲养管理、提高家禽的营养水平、适当应用药物预防继发感染、做好抑制性疾病的免疫接种、建立健全禽场生物安全体系等方面入手。定期进行血清学监测,根据检测结果分析禽群存在的问题及其原因,及时采取措施,果断淘汰阳性鸡,是防控鸡群免疫缺陷病的重要手段。

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